薄层层层析的原理:薄层层析是把支持物均匀涂布于支持板(常用玻璃板等等)上形成薄层,然后用相应的溶剂进行展开。薄层层析可根据作为固定相的支持物不同,分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。
固定相支持剂的选择和处理:在薄层层析时,对支持剂的选择主要考虑两方面:一是支持剂的性质与适用范围,二是支持剂的颗粒大小,一般来说,所选吸附剂应具有大的比表面积和足够的吸附能力,吸附剂对欲分离的不同物质应有不同的吸附能力,既有足够的分辨力,所选吸附剂与溶剂及样品组分不会发生化学反应,吸附力的强弱规律可概况如下:吸附力与两相间界面张力的降低成正比,某物质溶液中被吸附的程度与其在溶剂中的溶解度成反比,极性吸附剂易吸附极性物质,非极性吸附剂易吸附非极性物质,同组化合物的吸附程度有一定的变化方向,例如,同系物极性递减,而被非极性表面吸附的能力将递增。
薄层层析法的发展:薄层层析法由于其本身所具有的许多优点,几十年来,在混合物的分离、定性及定量分析中的应用相当普遍,并逐渐取代了纸层析分离技术,为了克服薄层层析法存在的某些不足,获得更有效的分离效果,在薄层制备、展开方式、分析鉴定手段以及相配套的仪器设备等方面近年来进行了许多革新,其中根本的是支持剂的改进,以一种直径更小的支持剂颗粒替代常规的支持剂所制备的薄层,比常规的薄层具有所需样品少,展开速率快、距离短、分辨力高等优点,而且此种新型的薄层具有较好的光学特性,更有利于对分离斑点进行光密度扫描。为了区别于常规的薄层层析分析法,通常将此种方法称为高效薄层层析法。