色谱柱的种类
一.高效反相液相色谱柱
以C18为代表的高效反相液相色谱柱一直是以药物发现、开发、方法验证(validation)为主,高效反相液相色谱柱也具有广泛的应用在药物代谢及动力学、生命科学、医疗健康、生物分析检测、毒品和兴奋剂检测、食品安全分析、环境分析等领域。高效反相液相色谱制备柱也是重要的分离纯化技术之一。
无论过去,现在还是未来,以球形B型硅胶(5um或3um)为材料骨架的高效反相液相色谱柱在实际应用中永远占有统治地位。常规HPLC方法的开发几乎总是从C18作为出发点,反相色谱占了80%以上的应用。
二.高效正相液相色谱柱
正相液相色谱是较早的色谱模式。直到现在,合成后通过硅胶柱做进一步纯化仍然是有机化学家日常工作的一个重要组成部分。在理论上,几乎所有的溶干正己烷,乙酸乙酯或异丙醇的有机化合物都可以用高效正相液相色谱分析。但在实际应用中,高效正相液相色谱的应用比高效反相色谱少得多。这是因为正己烷,乙酸乙酯没有像水,甲醇或乙腈那样受欢迎。此外,A型硅胶正相液相色谱给客户一个惯性思维:高效正相液相色谱的平衡时间很长。
事实上,高效正相液相色谱在制备规模的色谱纯化中一直发挥了重要作用。这是因为
(1)高效正相液相色谱比高效反相色谱柱压低得多。
(2)高效正相液相色谱用的溶剂例如正己烷,乙酸乙酯很容易通过旋转蒸发除去。
(3)吡咯等蒸发性溶剂彻底改善了碱性有机化合物在B型球形硅胶,Diol和PEG正相液相色谱柱上的峰形。
此外,不管制备规模或分析测试
(1)结构异构体分离分析必须使用正相液相色谱或超临界流体色谱。
(2)环境中腐殖酸的结构鉴定必须使用甲基化或硅烷化消除小分子聚集,然后使用正相液相色谱或超临界流体色谱。这种小分子聚集的自然现象一定相当广泛。
PEG正相液相色谱键合相等将让客户重新评估高效正相液相色谱的价值。
三.高效亲水液相色谱柱
高效亲水液相色谱是一个介于正相和反相高效液相色谱之间的运作模式。这个模式来自NH2色谱柱的糖分析应用。在此之后,逐步在Diol,硅胶和亲水性高分子键合相找到了一些有价值的应用。
近年来,高效亲水液相色谱成为比较流行的色谱的运作模式,主要是因为亲水性化合物有良好的保留和高效亲水液相色谱在LC-MS/MS中的应用。
四.高效强阳离子交换液相色谱柱
离子交换液相色谱是生物分离较为常见且有用的一种色谱模式。 另一方面,小分子分离分析极少使用高效离子交换液相色谱。这是因为:
(1)新颖的反相和多功能键合相和TX连续出现,在很大的程度上补偿了常规C18键合相的缺点。C18、C8键合相也有重大进展。高效亲水液相色谱柱也覆盖了许多分析应用。
(3)相比之下,硅胶基质的高效离子键合相几十年产量取得质的突破。硅胶基质的高效离子交换键合相柱寿命普遍短,疏水相互作用明显。
五.色谱柱的细分种类:
根据色谱柱的填料不同。目前市面上有以下色谱柱类型:
1.硅胶柱:硅胶是液相色谱法较早普及使用的色谱谱柱填料。其适用范用广。但是它只能在PH2.0-7.5的条件下使用,且使用温度一定要小于60度。
2.化学键合固相的色谱柱:
2.1. 非极性的键合的色谱柱:是应用较广的色谱柱C1到C22。其中C18是常用的非极性反相色谱柱,它的适用范围广泛,而且分离效果好。
2.2. 极性键合的色谱柱:常用的氨基(NH2)柱、氰基(CN)柱、二醇基(DIOL)、离子柱
2.2.1. 氦基柱的选择性首先表现为强的氢键结合能力,然后是在酸性介质中为弱阴离交换作用,叔胺基和粮分子的羟基有相互作用,用乙腈:水系统可以分离闪单糖、双糖、多糖等。
2.2.2. 腈基柱的分离特性与硅胶柱相似,但极性相对较弱,优点是梯度洗脱或流动相组成改变时平衡快,
2.2.3. 二醇基键合柱一般是缩甘油氧丙基硅烷键合相的水解产物,对有机酸和某些高聚物有较好的分离效果,也可用于某些蛋白质的水系体积排阻色谱。
3.高分子球色谱柱。
4.包覆聚合物的色谱柱。
5.微粒多孔碳填料的色谱柱。